Определение лактопероксидазы (ЛП) в сыром молоке

Определение лактопероксидазы (ЛП) в сыром молоке

Традиционные методы определения лактопероксидазы (ЛП) сложны и требуют много времени, поэтому для быстрого и удобного определения ЛП в сыром молоке была разработана тест-полоска, основанная на принципе ферментативной реакции.

Лактопероксидаза является представителем пероксидаз, группы природных ферментов, и состоит из одной полипептидной цепи, содержащей 612 аминокислотных остатков. Его молекулярная масса составляет около 78 кДа. ЛП широко распространен в молочных, слюнных и слезных железах и их секретах.

ЛП — один из самых термостабильных ферментов в молоке, и его разрушение используется как показатель эффективности пастеризации сырого молока. ЛП лишь частично инактивируется при короткой пастеризации при 74 °C. Маркс и др. (2001) подтвердили, что ЛП сохраняет свою активность при обычной пастеризации (63°C в течение 30 мин или 72 °C в течение 15 с), но разрушается при пастеризации при 80 °C в течение 4 с (Сейфу и др., 2005). ЛП также используется в качестве диагностического индикатора субклинического мастита в молоке коров. ЛП и тиоцианат вместе с перекисью водорода (H2O2) образуют систему ЛП (ЛПС), которая считается наиболее значимым микробным ингибитором не только в молоке и молочных продуктах, но и в рыбоводстве и функциональных продуктах питания. Также было показано, что ЛП имеет лекарственное значение. Ввиду важного применения ЛП важно иметь возможность обнаружить его активность в молоке и молочных продуктах во время их переработки, транспортировки и хранения.

Было описано много методов обнаружения ЛП, в основном основанных на цветных реакциях. Кумар и Бхатия (1999) использовали 2,2'-азинобис-(3-этил бензтиазолин-6-сульфоновую кислоту) (ABTS) в качестве хромогенного субстрата для стандартизации спектрофотометрического метода измерения активности ЛП в молоке. ABTS и гваякол использовались в качестве субстратов для обнаружения для изучения влияния обработки высоким давлением на денатурацию ЛП. Fonteh et al. (2005) подтвердили, что на активность ЛП влияют различные соединения, присутствующие в реакционной системе ABTS. 3,3', 5,5'-Тетраметилбензидин (ТМБ) использовался для обнаружения активности ЛП в человеческом молоке. В этих методах обнаружения ЛП образцы молока должны быть предварительно обработаны, процедуры обнаружения сложны, требуется высокая квалификация лаборантов и сложное оборудование. Поэтому разработка быстрого и удобного метода обнаружения ЛП с высокой чувствительностью и точностью имеет большое теоретическое и практическое значение для сбора сырого молока и онлайн переработки молочных продуктов, содержащих ЛП.

Как правильно содержать телят, чтобы не допустить развития инфекций?

Ротавирус A (RVA) и коронавирус крупного рогатого скота (CoV) — два основных вирусных энтеропатогена, связанных с диареей новорожденных телят, и они широко распространены по всему миру. Они являются хорошо распознаваемыми этиологическими агентами синдрома диареи новорожденных телят наряду с другими патогенами. Факторы риска, связанные с окружающей средой и методами управления, могут оказывать непосредственное влияние на заболеваемость и эпидемиологию этих вирусных диарей. Одним из таких факторов является система содержания телят. По данным перекрестных исследований, системы индивидуального содержания сводят к минимуму заражение энтеральными патогенами и снижают риск диареи.

Что касается инфекций RVA и CoV у телят, существует всего несколько продольных исследований, и большинство из них были проведены на молочных фермах с индивидуальной системой содержания. Таким образом, истинное влияние систем содержания на передачу и уровень инфицирования бычьим RVA и CoV у телят не было полностью изучено.

Целью исследования было определить влияние индивидуальных или групповых систем содержания телят на эпидемиологию RVA и CoV у телят с молочных ферм посредством продольного исследования.

Проведённая работа показала следующее. Доля телят, зараженных хотя бы один раз RVA и CoV, составила 63,3% (7/11) и 100% (9/9) в FA и FB, соответственно. Всего было собрано 160 проб фекалий от 20 телят. Доля проб, положительных на RVA и CoV, выше в FB (23,6%), чем в FA (9%) для обоих антигенов, и эта разница статистически значима. Только один теленок из ФА коинфицирован обоими вирусами (теленок № 11, на 35-й день).

У телят из FA (индивидуальное содержание) линька RVA была зарегистрирована между 21 и 42 днями жизни, в то время как линька CoV была обнаружена только у двух телят на 2 и 35 день, соответственно. У телят из FB (групповое содержание) антигены RVA и CoV были обнаружены в основном в первые 2 недели жизни. Индивидуальное содержание было протекторным фактором для заражения RVA у телят менее 2 недель жизни в FA, в то время как телята менее 2 недель жизни из FB показали более высокий риск заражения RVA, чем более старые животные в этой ферме.

Доля образцов с диареей существенно не отличалась между фермами (FA 18/88; FB 11/72). В FA 63% (7/11) и FB 77% (7/9) телят имели по крайней мере один эпизод диареи, с 2,5 и 1,3 случаями диареи в день, соответственно. В FA на 7 день жизни распространенность телят с диареей достигла максимума, и в целом она оставалась постоянной до конца исследования. В FB, начиная с первых дней жизни (день 0), было обнаружено больных телят с максимальной распространенностью на 7 и 21 день жизни, где она начинает снижаться до конца исследования.

Целью настоящего исследования было определить, являются ли условия содержания и другие методы управления, включая потребление колострума (непосредственно от плотиц или искусственное кормление) телятами в возрасте до 7 недель жизни, факторами риска заражения и заболевания CoV и RVA в ходе продольного исследования. В данном исследовании мы наблюдали в системе группового содержания (FB) более высокий уровень RVA и CoV инфекций у телят. Эти результаты согласуются с общими рекомендациями, согласно которым телят следует выращивать в индивидуальных загонах до 3-недельного возраста, где избегание прямого контакта между животными поможет свести к минимуму передачу вирусных инфекций.

Что касается временных рамок выделения вирусов в данном исследовании, то RVA и CoV наблюдались в период с 3 по 6 неделю жизни у животных, содержавшихся в индивидуальных помещениях, и в первые 2 недели жизни у животных, содержавшихся в групповых помещениях. Эти результаты согласуются с результатами исследования Heckert et al., в котором телята, содержавшиеся в домиках или на привязи, демонстрировали выделение CoV из фекалий и дыхательных путей, начиная с 4 недели жизни.

Что касается иммунного ответа телят при различных системах выращивания, то у телят, содержащихся в групповом помещении (FB), где колострум вводился искусственно с помощью бутылок, титры Ab были выше, чем титры Ab у телят, содержащихся в индивидуальных помещениях, где колострум получали непосредственно от плотины, как и сообщалось ранее. Несмотря на более высокий титр Abs после приема колострума у телят, содержащихся в группе, по сравнению с телятами, содержащимися индивидуально, наблюдалась более высокая доля сероконверсии и выделения вируса у телят, содержащихся в группе (FB), что подтверждает гипотезу о том, что групповое содержание увеличивает контаминацию окружающей среды вирусными патогенами, где телята с высокими титрами Ab все равно заражаются. Однако тот факт, что теленок может заразиться без развития диареи при наличии высоких титров циркулирующих материнских Ab, был изучен ранее. Более высокие титры Ab к CoV в колоструме матери и сыворотке телят в FB могут быть связаны с более высокой циркуляцией этого вируса в этом хозяйстве.

Поскольку это было обсервационное исследование, не было контроля ни одной из переменных, которые могли бы повлиять на результат. Тенденции в отношении вирусной инфекции и диареи, обнаруженные в ходе исследования, вероятно, были бы более очевидными (статистически значимыми) при сравнении обеих систем выращивания, если бы в исследовании участвовало большее количество телят и за ними следили ежедневно, а не еженедельно. Несмотря на то, что целью исследования было изучение RVA и CoV, было бы полезно исследовать другие патогены, участвующие в микробиологии диареи новорожденных телят.